一、项目简介：
我科目前开展的结核分枝杆菌及利福平耐药基因检测项目，可用于对所有疑似结核患者的初始诊断，为确诊结核病（包括肺结核与肺外结核）提供病原学证据，显著提高结核病诊断的病原学阳性率；对确诊患者可同时检测其是否对利福平耐药，以指导后续治疗。该项目基于GeneXpert分子检测平台，采用半巢式实时荧光定量PCR技术，是目前WHO唯一推荐的快速结核检测技术。
二、临床意义：
结核病（Tuberculosis,TB）被列为我国重大传染病之一，由结核分枝杆菌（Mycobacteriumtuberculosis,MTB）感染引起，包括肺结核（Pulmonarytuberculosis,PTB）与肺外结核（ExtrapulmonaryTuberculosis,EPTB）。据WHO最新统计，我国的每年新发结核病例数约90万，列全球第2。近年我国每年报告结核病发病人数约万，居甲乙类传染病之首；值得注意的是，耐多药肺结核（Multidrugresistance,MDR-TB）每年新发患者约12万，未来数年内可能出现以耐药菌为主的结核病流行态势。
传统结核实验室病原学断方法主要包括抗酸染色镜检，分枝杆菌培养和一般PCR法等，均有一定的局限性：（1）抗酸染色镜检的灵敏度低，且无法区分非结核分枝杆菌（NTM）；（2）分枝杆菌培养对实验室生物安全要求较高，且需2-7周才能出结果报告，难以满足临床需要；（3）一般PCR法实验操作过程复杂，无法同时满足简单快速、准确安全的检测要求。
我科现开展的该项目，采用XpertMTB/RIF检测试剂盒，利用微流体技术，在检测匣内全封闭、且快速完成样本处理、核酸提取、基因扩增，可同时进行结核诊断与利福平耐药检测，对肺结核、骨与关节结核的快速、精准诊断以及指导治疗，都具有重要意义。
上图所示，Xpert与IGRA（Tb-spot）相结合，协助结核的诊断。
三、检测原理：
采用半巢式实时荧光定量PCR技术，针对结核分枝杆菌rpoB基因81bp利福平耐药核心区间（Rifampinresistancedetermingregion,RRDR）中5个位点，设计引物和探针，检测其是否发生突变，进而用于诊断是否为结核分枝杆菌以及是否对利福平耐药（rpoB序列存在突变）。采用样本处理质控（SPC）和探针质控（PCC），实现对每个样本检测的全程监控，确保检测准确度，结果通过GeneXpertSystem测量荧光信号和内设的算法进行判定。
如上图所示，对结核分枝杆菌及利福平耐药突变基因同时检测，
文献报道该方法检测阳性标本的灵敏度和特异性分别为98.2%和99.2%；检测利福平耐药灵敏度和特异性分别为97.6%和98.1%。
四、采样要求：
可对多种标本（除血液外）进行检测，推荐送检以下标本：
（1）呼吸道标本：包括痰、肺泡灌洗液（BALF）等，取2-4ml标本置于无菌痰杯中，拧紧瓶盖，尽快送检；
（2）穿刺液样本：包括胸水、腹水、关节穿刺液等，取2-4ml标本置于无菌痰杯中送检；
（3）除上述样本外，也可送检尿液、粪便或组织标本，可与（新龙泽微生物及分子检测组）联系。
五、医嘱项设置：
（1）医嘱名称：结核分枝杆菌及利福平耐药基因检测（可按拼音搜索），三个院区均可开医嘱。
（2）标本留取：请务必注明标本类型，呼吸道、穿刺液等标本应置于无菌痰杯中，拧紧瓶盖，贴好条码，尽快送检。
（3）报告发送：3个工作日内。
（4）联系（新龙泽微生物及分子检验组）
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